在進行抗氧化性能的測定時，常常會用到DPPH法。當使用Vc作為對照組時，其稀釋液的選擇成為實驗的關鍵環節。以下是對該方法的詳細描述和探索。

一、DPPH自由基清除率的測定

我們需要精確稱取一定量的DPPH，并用無水乙醇配制成濃度為0.04mg/mL的DPPH溶液。接著，分別取不同濃度（如2，4，6，8mg/mL）的溶液2mL，再加入等量的DPPH溶液進行混合。在室溫下靜置30分鐘后，以5000r/min的速度離心10分鐘。隨后，取上清液在517nm處測量其吸光度。Vc作為陽性對照，用于比較樣品的抗氧化性能。樣品的DPPH自由基清除率可以通過以下公式計算得出。

二、總還原能力的評估

在10mL的離心管中，我們加入0.2mol/L、pH值為6.6的磷酸緩沖液和不同濃度的樣品溶液各一定量。再加入鐵溶液進行反應，然后在50℃下維持20分鐘。反應結束后，加入三來終止反應，并再次離心。取上清液與蒸餾水及FeCl3混合后，靜置10分鐘，并在700nm處測量其吸光度。同樣地，Vc作為陽性對照以供參考。

DPPH法——一種常用的抗氧化性評估手段

DPPH法是一種廣泛用于評估食品、藥品等樣品抗氧化性能的方法。該方法基于DPPH自由基與抗氧化劑的相互作用原理。DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）為紫色自由基，其分子中含有一個未成對電子，具有強烈的吸收能力。當DPPH與抗氧化劑發生反應時，其未成對電子被轉移給抗氧化劑，導致DPPH自由基減少并呈現出淡 *** 或無色，同時吸光度也會隨之降低。通過測量反應前后DPPH自由基的吸光度差異，我們可以計算出樣品的抗氧化能力。

具體實驗步驟如下：

1. 準備階段：將待測樣品溶解或懸浮在適當的溶劑中。

2. DPPH溶液預處理：將DPPH粉末溶解在適當的溶劑中，使其在515nm處的吸光度達到1.0± 0.1左右。

3. 反應過程：將待測樣品與預處理好的DPPH溶液混合并充分反應。

4. 吸光度測定：將反應后的混合液放入分光光度計中，測量其在515nm處的吸光度。

5. 抗氧化能力計算：通過比較反應前后DPPH溶液的吸光度差異來計算樣品的抗氧化能力。

通常來說，樣品的抗氧化能力越強，與DPPH反應后DPPH溶液的吸光度下降幅度越大，即吸光度差值越大。DPPH法可快速評估不同食品、藥品等樣品的抗氧化能力，并可用于篩選和優選具有較強抗氧化能力的物質。

除了上述的測定方法外，還有其他的如DPPH吸收光譜測定法、DPPH消退法和DPPH減色法等常用手段可以用于評估化合物的抗氧化能力。這些方法都是基于DPPH自由基與抗氧化劑的相互作用原理進行實驗的。

DPPH法是一種有效且常用的評估食品、藥品等樣品抗氧化性能的方法。通過上述的詳細步驟和實驗方法，我們可以更準確地了解樣品的抗氧化能力并篩選出具有較強抗氧化能力的物質。