親愛的讀者們，今天我們聊一聊蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)中不可或缺的TBST和PBST緩沖溶液。它們雖然名字相似，但成分和用途卻有所不同。了解它們的特點(diǎn)和適用場景，對(duì)實(shí)驗(yàn)成功至關(guān)重要。讓我們一起來探討，選擇最合適的緩沖液，助力實(shí)驗(yàn)研究。

在蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）中，TBST和PBST是兩種常用的緩沖溶液，但它們并非同一物質(zhì)，下面，我們將深入探討兩者的區(qū)別和用途。

1、TBST的組成：TBST是TBS（Tris Buffered Saline）和Tween-20的縮寫，TBS是一種含有Tris-HCl、NaCl和Tween-20的緩沖溶液，常用于蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)中的洗滌步驟，TBS提供緩沖的pH值環(huán)境，而Tween-20則有助于蛋白質(zhì)的洗脫。

2、PBST的組成：PBST是PBS（Phosphate Buffered Saline）和Tween-20的縮寫，PBS是一種含有NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4的緩沖溶液，其pH值通常為7.4，與細(xì)胞內(nèi)的pH值相近，PBST在Western Blot實(shí)驗(yàn)中也用于洗滌步驟，其作用與TBST相似。

3、兩者區(qū)別：雖然TBST和PBST都含有Tween-20，但它們的pH值和離子組成有所不同，在Western Blot實(shí)驗(yàn)中，使用PBST時(shí)需注意，因?yàn)镻BST中含有磷酸基團(tuán)，可能會(huì)干擾磷酸化蛋白的檢測(cè)。

4、使用建議：在進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn)時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的緩沖溶液，檢測(cè)磷酸化蛋白時(shí)，建議使用TBST；而檢測(cè)非磷酸化蛋白時(shí)，可以使用PBST。

PBS緩沖液的配制是什么？

PBS緩沖液是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常用的緩沖溶液之一，其配制方法如下：

1、原料：稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）、氯化鈉（NaCl）、氯化鉀（KCl）和吐溫-20。

2、配制步驟：

- 稱取KH2PO4 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、NaCl 8.0g、KCl 0.2g和吐溫-20 1.0g。

- 將上述物質(zhì)溶解于800mL蒸餾水中。

- 用HCl調(diào)節(jié)溶液至pH 7.4。

- 加蒸餾水定容至1L。

3、注意事項(xiàng)：

- 配制PBS緩沖液時(shí)，需注意精確稱量和溶解。

- 配制后的PBS緩沖液需儲(chǔ)存于4℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。

PBST該如何配制？

PBST是PBS和Tween-20的混合溶液，其配制方法如下：

1、原料：稱取PBS緩沖液和Tween-20。

2、配制步驟：

- 將PBS緩沖液稀釋至所需濃度（1×PBS）。

- 稱取Tween-20，加入適量蒸餾水溶解。

- 將溶解后的Tween-20溶液加入PBS緩沖液中，混勻。

3、注意事項(xiàng)：

- PBST的配制過程中，需注意Tween-20的加入量，過量可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

- 配制后的PBST溶液需儲(chǔ)存于4℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。

請(qǐng)問PBS緩沖液如何配？謝謝

PBS緩沖液的配制方法如下：

1、原料：稱取KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl、KCl和吐溫-20。

2、配制步驟：

- 稱取KH2PO4 0.2g、Na2HPO4·12H2O 2.9g、NaCl 8.0g、KCl 0.2g和吐溫-20 1.0g。

- 將上述物質(zhì)溶解于800mL蒸餾水中。

- 用HCl調(diào)節(jié)溶液至pH 7.4。

- 加蒸餾水定容至1L。

3、注意事項(xiàng)：

- 配制PBS緩沖液時(shí)，需注意精確稱量和溶解。

- 配制后的PBS緩沖液需儲(chǔ)存于4℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。

PBST配置，調(diào)節(jié)pH值是在加Tween之前，還是之后呢？

在配制PBST緩沖液時(shí)，調(diào)節(jié)pH值通常是在加入Tween-20之前，以下是具體步驟：

1、稱取原料：稱取KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl、KCl和吐溫-20。

2、溶解物質(zhì)：將KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl和KCl溶解于800mL蒸餾水中。

3、調(diào)節(jié)pH值：用HCl調(diào)節(jié)溶液至pH 7.4。

4、加入Tween-20：將吐溫-20加入溶液中，混勻。

5、定容：加蒸餾水定容至1L。

6、儲(chǔ)存：將配制好的PBST緩沖液儲(chǔ)存于4℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。

Western Blot基本原理及步驟

Western Blot，即蛋白質(zhì)印跡法，是一種常用的蛋白質(zhì)分析技術(shù)，以下是Western Blot的基本原理及步驟：

1、基本原理：Western Blot通過將目標(biāo)蛋白從復(fù)雜的混合物中分離并定量檢測(cè)，以確定蛋白質(zhì)的存在與表達(dá)水平。

2、操作步驟：

（1）蛋白質(zhì)樣品獲得：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，獲取蛋白質(zhì)樣品，細(xì)菌誘導(dǎo)表達(dá)后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細(xì)胞；真核細(xì)胞加勻漿緩沖液，機(jī)械或超聲波室溫勻漿0.5-1min，4℃，13,000g離心15min，取上清液作為樣品。

（2）SDS-PAGE電泳：將蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離。

（3）轉(zhuǎn)膜：將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體上，如PVDF膜或NC膜。

（4）封閉：將轉(zhuǎn)膜后的膜用封閉液（如5%脫脂奶粉）封閉，以防止非特異性結(jié)合。

（5）一抗孵育：將一抗（針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體）加入封閉后的膜，進(jìn)行孵育。

（6）洗滌：用TBST或PBST洗滌膜，去除未結(jié)合的一抗。

（7）二抗孵育：將二抗（針對(duì)一抗的抗體）加入洗滌后的膜，進(jìn)行孵育。

（8）洗滌：用TBST或PBST洗滌膜，去除未結(jié)合的二抗。

（9）顯影：將膜與化學(xué)發(fā)光底物反應(yīng)，觀察目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。

3、注意事項(xiàng)：

- Western Blot實(shí)驗(yàn)中，選擇合適的抗體和封閉液至關(guān)重要。

- 實(shí)驗(yàn)過程中，需嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

- Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果需結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行綜合分析。